高三2025普通高等学校招生全国统一考试·临门一卷(一)1生物(山东)试题
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25.(12分)诺如病毒(HuNoV)为单链RNA病毒,是导致人急性胃肠炎的最常见的病原体之一,其衣壳蛋白vpl蛋白具免疫原性,且可自组装成空心的病毒样颗粒(VLP)。科研人员利用昆虫杆状病毒表达系统制备VLP,即以杆状病毒为载体,通过特异性感染昆虫细胞生产VLP基因工程疫苗,部分技术路线如图1所示。回答下列问题:Lef-2甲BAC线性DNA③共转染vpIRNA①vp1基因④提取同源重组拼接vp1基因昆虫SF9细胞重组杆状病毒重组转移载体质粒侵染转移载体质粒昆虫HF细胞收集VPI蛋白图1引物1引物3-3'a链(模板链)5'3'a链5'vp1基因His基因3’5'b链3'5'b链(模板链)引物2引物4启动子vp1基因is基因终止子3'融合基因图2(1)为了后续实验中方便蛋白的纯化,需将vpl基因与小段His标签基因序列相连,形成融合基因(图2),并与转移载体质粒连接,构建出重组转移载体。现欲通过PCR判定融合基因已准连接,应选择图2中的引物组合是PCR扩增产物经琼脂糖凝胶电泳,结果符合预期,通常还需进行序列测定,原因是琼脂糖凝胶电泳技术(2)昆虫HF细胞能高效表达外源基因,是与载体上的(结构)有关。从结构上看,外源基因能和病毒DNA拼接的原因是。构建重组杆状病毒要在昆虫细胞系中共转染,其原因是(3)当目的基因两侧的小段序列与表达载体上某序列相同或相似时,可通过同源切割后进行片段互换实现同源重组。将含有vp1基因的重组转移载体质粒与携带杆状病毒基因组的BAC线性DNA共转染到昆虫SF9细胞中,通过一步转染即可实现重组杆状病毒的高效生成。已知ORF是病毒在昆虫细胞中复制的必备元件,△ORF是部分片段缺失的ORF(能在大肠杆菌中复制,不能在昆虫细胞中复制)。推测图1所示制备过程中,SF9细胞中只产生重组杆状病毒的必要条件是(多选)A.甲为△ORF,乙为ORFB.BAC线性DNA为线状而非环状C.BAC线性DNA含抗生素抗性基因D.BAC线性DNA含杆状病毒基因组(4)为扩大疫苗产量,昆虫HF细胞应选择(填“贴壁”或“悬浮”)生长型细胞。与大肠杆菌为受体细胞相比,用昆虫细胞作为受体细胞生产VLP可更好的保留vpl蛋白的抗原性,其原因是10
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